牛（Bovine）脫氨基酪氨酸（Desaminotyrosine）ELISA檢測試劑盒（競爭法）【產品貨號】DM-Cat9893【包裝規格】48/96T【用途】本試劑盒用于體外定量檢測[樣本類型，如：人血清、血漿、組織勻漿等]中的含量。僅供科研使用，不用于臨床診斷。【檢測原理】試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被檢測指標抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成＊終的黃色。顏色的深淺和樣品中的檢測指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。1 將抗體包被在酶標板底部，加入待測抗原2 加入酶標二抗放大信號3 捕獲抗體和檢測抗體分別結合抗原的不同表位，形成“抗體-抗原-抗體”的三明治結構4 加入底物5 酶催化底物顯色，吸光度與抗原濃度成正比，適用于大分子抗原的定量檢測，如細胞因子、蛋白質等【主要組成成分】組分名稱規格數量酶標板96孔（包被抗體）1塊標準品[濃度，如：0 ng/mL, 2 ng/mL, 4 ng/mL, 8 ng/mL, 16 ng/mL, 32 ng/mL]6瓶酶標記抗體10mL1瓶底物溶液（TMB）10mL1瓶終止液（2M H?SO?）10mL1瓶濃縮洗滌液（20×）50mL1瓶樣品稀釋液30mL1瓶說明書-1份【儲存條件及有效期】試劑盒未開封時，于2-8℃避光保存，有效期為6個月。酶標板需密封保存于2-8℃，避免受潮。【需要準備的器材和試劑】1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱【操作步驟】1. 試劑準備濃縮洗滌液：用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（如5mL濃縮洗滌液+95mL水），充分混勻。稀釋后的洗滌液在2-8℃可保存1周。標準品：根據說明書要求，用樣品稀釋液將標準品進行梯度稀釋（具體稀釋方法見說明書附錄）。酶標記抗體：使用前需室溫平衡30分鐘，若有沉淀，可輕輕混勻。2. 樣本處理按照常規方法采集和處理[樣本類型]，具體處理步驟如下：血清：全血樣本室溫靜置30分鐘，3000rpm離心10分鐘，取上清液。血漿：使用抗凝管采集血液，3000rpm離心10分鐘，取上清液。組織勻漿：取適量組織，按1:9比例加入PBS（pH7.4），冰浴勻漿，3000rpm離心10分鐘，取上清液。樣本需在-20℃保存，避免反復凍融，檢測前需室溫解凍并充分混勻，如有沉淀需再次離心。3.加樣將酶標板從鋁箔袋中取出，平衡至室溫。設標準品孔、樣本孔和空白孔。空白孔加50μL樣品稀釋液，標準品孔分別加50μL不同濃度的標準品，樣本孔加50μL待測樣本。輕輕震蕩混勻，37℃孵育30分鐘。4. 洗滌棄去孔內液體，拍干。每孔加入200μL稀釋后的洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。5. 加酶標記抗體除空白孔外，每孔加入50μL酶標記抗體。輕輕震蕩混勻，37℃孵育30分鐘。6. 洗滌同步驟4，洗滌5次。7. 顯色每孔加入50μL底物溶液（TMB），輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。8. 終止每孔加入50μL終止液，輕輕震蕩混勻，此時藍色立即變為黃色。9. 測定在終止反應后10分鐘內，用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。【結果計算】以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪制標準曲線，或使用酶標儀自帶軟件進行曲線擬合。根據樣品的OD值，從標準曲線上查出相應的[檢測項目名稱]濃度。標準曲線繪制示例：標準品濃度（ng/mL）：0, 2, 4, 8, 16, 32對應的OD值：[示例值，如：0.100, 0.250, 0.480, 0.850, 1.400, 2.100]建議采用四參數 logistic 曲線（4-PL）擬合，相關系數R2應≥0.99。【檢測方法的局限性】本試劑盒僅供科研使用，結果不能作為臨床診斷的唯一依據。樣本處理不當可能導致結果偏差，應嚴格按照說明書操作。高濃度樣本可能存在hook效應，建議對OD值異常高的樣本進行適當稀釋后重新檢測。【注意事項】實驗前請仔細閱讀說明書，嚴格按照操作步驟進行。所有試劑需在有效期內使用，不同批次的試劑不得混用。操作時需戴手套、口罩，避免試劑接觸皮膚和黏膜。TMB底物溶液有潛在致癌性，終止液為強酸，操作時需小心，若不慎接觸，立即用大量清水沖洗。實驗結束后，廢棄物應按照生物安全規定處理。【標準品稀釋方法】1. 高濃度標準品（如32 ng/mL）為母液，無需稀釋。2. 取50μL 32 ng/mL標準品加入50μL樣品稀釋液中，混勻，得到16 ng/mL標準品。3. 取50μL 16 ng/mL標準品加入50μL樣品稀釋液中，混勻，得到8 ng/mL標準品。4. 依次類推，稀釋得到4 ng/mL、2 ng/mL標準品。5. 0 ng/mL標準品即為樣品稀釋液。【篤瑪實驗服務代測】ELISA實驗代測ELISA（酶聯免疫吸附實驗）代測是科研和臨床檢測中＊常用的外包服務之一，基于抗原抗體特異性結合原理，可對生物樣本中的微量物質進行定量或定性檢測。一、按檢測靶標類型分類1. 細胞因子與趨化因子類這是科研中需求量＊大的代測類別，主要用于免疫、炎癥、腫瘤、心血管等研究白細胞介素家族：IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-17、IL-23 等干擾素家族：IFN-α、IFN-β、IFN-γ腫瘤壞死因子家族：TNF-α、TNF-β、LTA趨化因子家族：CCL2 (MCP-1)、CCL5 (RANTES)、CXCL8 (IL-8)、CXCL10 (IP-10)生長因子家族：EGF、VEGF、FGF、PDGF、TGF-β、NGF、IGF-12. 炎癥與免疫相關標志物急性期反應蛋白：CRP、SAA、PCT、纖維蛋白原補體系統：C3、C4、C5a、C1q免疫球蛋白：IgG、IgA、IgM、IgE、IgD 及各亞型免疫細胞表面標志物：sCD4、sCD8、sCD14、sCD1633. 激素與內分泌相關垂體激素：FSH、LH、TSH、GH、PRL、ACTH甲狀腺激素：T3、T4、FT3、FT4、TSH性激素：雌二醇 (E2)、孕酮 (P)、睪酮 (T)、雌酮、脫氫表雄酮代謝激素：胰島素、胰高血糖素、瘦素 (Leptin)、脂聯素 (Adiponectin)、抵抗素應激激素：皮質醇、腎上腺素、去甲腎上腺素4. 腫瘤標志物廣譜腫瘤標志物：CEA、AFP、CA125、CA19-9、CA15-3、CA72-4器官特異性標志物：PSA (前列腺)、NSE (神經內分泌)、CYFRA21-1 (肺癌)、SCC (鱗狀細胞癌)腫瘤相關蛋白：MMP-2、MMP-9、TIMP-1、VEGF、EGFR5. 自身抗體類抗核抗體譜：ANA、抗 ds-DNA、抗 Sm、抗 SSA、抗 SSB類風濕相關：RF、抗 CCP、抗角蛋白抗體血管炎相關：ANCA (c-ANCA、p-ANCA)、抗內皮細胞抗體其他自身抗體：抗甲狀腺抗體 (TPOAb、TgAb)、抗胰島素抗體、抗磷脂抗體6. 心血管疾病相關標志物心肌損傷標志物：cTnI、cTnT、CK-MB、Myoglobin心功能標志物：BNP、NT-proBNP動脈粥樣硬化標志物：ox-LDL、Lp-PLA2、hs-CRP、同型半胱氨酸凝血與纖溶：D - 二聚體、FDP、PAI-1、t-PA7. 神經科學相關神經遞質：5 - 羥色胺、多巴胺、去甲腎上腺素、乙酰膽堿、γ- 氨基丁酸神經退行性標志物：Aβ1-40、Aβ1-42、Tau 蛋白、磷酸化 Tau 蛋白神經炎癥標志物：GFAP、S100B、NSE、MBP8. 其他常見靶標代謝物：葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐病原體抗原 / 抗體：乙肝五項、丙肝抗體、梅毒抗體、HIV 抗體、新冠病毒抗原 / 抗體藥物濃度：抗生素、化療藥物、免疫抑制劑血藥濃度qPCR實驗代測實驗四步走：1. 提取RNA → 記得防RNase污染！用Trizol＊穩2.逆轉錄 → 把RNA變成cDNA，這是關鍵一步3.上機運行 → 探針法更特異，染料法更便宜4.數據分析 → 用 2^(-ΔΔCt) 公式算相對表達量！ 血淚注意事項：引物Tm值＊好在60-64℃哦！染料法(如SYBR Green)一定要看熔解曲線，排除非特異性擴增！基線和閾值設置別亂調～所有操作都要防核酸酶污染！
牛（Bovine）藍舌病抗體（BLU-Ab）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9908產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）赤羽病抗體（AK-Ab）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9904產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）口蹄疫非結構蛋白抗體（FMDV-NSP）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9902產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）副結核病抗體（Paratuberculosis-Ab）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9899產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC抗體（FMD-NSP Ab）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9895產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）Q熱抗體（Q Fever Ab）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9892產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）副結核病（Paratuberculosis）ELISA檢測試劑盒該試劑盒僅用于科研實驗?產品貨號：DM-Cat9891產品規格：48/96T一、ELISA 檢測原理ELISA（酶聯免疫吸附測定）核心是抗原 - 抗體特異性結合?+?酶促顯色反應，通過顏色深淺反映待測物濃度。常用類型及原理：1.?雙抗體夾心法（測大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕獲抗體 → 加入樣本（待測抗原）→ 結合酶標檢測抗體 → 加底物顯色 → 吸光度與抗原濃度正相關。?2.?間接法（測抗體）固相包被抗原 → 樣本中待測抗體結合 → 加酶標二抗 → 底物顯色 → 吸光度與抗體濃度正相關。3.?競爭法（測小分子抗原 / 半抗原）待測抗原與酶標抗原競爭結合有限抗體 → 待測物越多，顯色越淺 → 吸光度與濃度負相關。二、試劑盒的組成三、ELISA實驗所需材料（一）試劑盒本身（核心）1.?預包被酶標板（96 孔）2.?標準品（梯度濃度）3.?酶結合物（酶標抗體 / 酶標抗原）4.?樣本稀釋液5.?洗滌液（濃縮液，使用前稀釋）6.?顯色底物液（A、B 液或單液）7.?終止液8.?封板膜 / 封板膠?（二）樣本相關1.?待測樣本（血清、血漿、細胞上清、組織勻漿等）2.?樣本處理試劑（視樣本類型）：抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸鈉等）蛋白酶抑制劑（如組織樣本）裂解液、勻漿緩沖液等?（三）儀器設備1.?酶標儀（450 nm 為主，部分需雙波長）2.?洗板機（推薦）或洗板瓶 / 排槍3.?移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4.?移液器吸頭（帶濾芯更佳）5.?渦旋振蕩器6.?離心機（樣本處理用）7.?恒溫培養箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8.?冰箱（2–8℃、-20℃）?（四）耗材與輔助用品1.?EP 管、凍存管2.?一次性手套、口罩3.?吸水紙 / 濾紙4.?計時器5.?去離子水 / 蒸餾水（用于洗滌液稀釋）6.?廢液缸、吸水紙?（五）可選 / 特殊實驗材料1.?封板膜 / 封板膠2.?振蕩器（微孔板搖床）3.?多道移液器（8/12 道）4.?加樣槽5.?微孔板封口膜、鋁箔（避光）?四、試劑準備的注意事項1.所有試劑按說明書指定溫度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免陽光直射，酶結合物、底物需避光3.不同批號試劑不可混用4.加樣前檢查試劑是否渾濁、沉淀、變色，異常則棄用5.所有試劑開蓋后盡快使用，剩余按要求保存?五、結果計算（通用流程）1.?數據處理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以標準品濃度為 X，校正 OD 為 Y，做標準曲線（常用四參數擬合 4PL）。 2.濃度計算（1）樣本 OD 代入標準曲線，得到理論濃度 C?。（2）若樣本經稀釋，＊終濃度：C=C0×稀釋倍數2.?有效性判定（常見）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）標準曲線 R2 ≥ 0.98；（3）質控（QC）在可接受范圍；（4）樣本 OD 超出曲線上限 / 下限時需重新稀釋 / 濃縮復測。?六、示例（雙抗體夾心法）標準品濃度：0、10、20、50、100、200 pg/mL測得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90擬合曲線后，某樣本校正 OD=0.35 → 曲線讀出 C?≈30 pg/mL若樣本稀釋 5 倍，則＊終濃度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。?
牛（Bovine）肌醇（Inositol）ELISA檢測試劑盒產品貨號：DM-Cat9889產品規格：48/96TELISA 檢測試劑盒的檢測原理ELISA 全稱酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是目前生物檢測領域應用＊廣泛的免疫分析技術，該試劑盒僅用于科研檢測。其核心總原理是：基于抗原與抗體的特異性免疫識別結合反應，耦合酶對底物的高效催化信號放大效應，將免疫結合的特異性信號轉化為可通過酶標儀定量檢測的顯色 / 光信號；通過固相吸附與洗滌步驟實現結合態與游離態物質的徹底分離，＊終實現對待測物（抗原或抗體）的高特異性、高靈敏度定性與定量檢測。一、ELISA 試劑盒的核心基礎元件與作用所有 ELISA 試劑盒均圍繞四大核心元件構建，是實現檢測的基礎：固相載體：主流為 96 孔 / 384 孔聚苯乙烯酶標板，可通過疏水作用穩定吸附蛋白類抗原 / 抗體，且不破壞其免疫活性，為免疫反應提供固定的固相界面。免疫核心試劑：包被用捕獲抗原 / 抗體、酶標記的檢測抗原 / 抗體（酶標結合物）。基于抗原表位與抗體互補決定區（CDR）的特異性結合，是保證檢測特異性的核心，可＊大程度避免交叉反應。酶 - 底物信號系統：＊常用辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）。酶分子具備極高的催化效率，一個酶分子可在短時間內催化大量底物分子生成有色產物，實現檢測信號的級聯放大，讓 ELISA 可檢測 pg/mL 甚至 fg/mL 級別的微量待測物；產物的吸光度（OD 值）與待測物含量存在明確的劑量 - 效應關系，是定量檢測的核心依據。封閉與洗滌體系：封閉液（如 BSA、脫脂奶粉）用于覆蓋酶標板上未吸附蛋白的空白位點，阻斷非特異性結合，降低背景干擾；洗滌液用于徹底分離固相結合的免疫復合物與游離的未結合物質，去除樣本雜質和多余試劑，保障檢測結果的準確性。二、主流 ELISA 試劑盒的分型檢測原理根據檢測靶標、分子大小與應用場景的不同，商品化 ELISA 試劑盒主要分為以下 5 種經典類型，其中雙抗體夾心法、競爭法、間接法為市場主流。1. 雙抗體夾心法（大分子抗原檢測＊＊，＊主流）核心適用場景：檢測具有至少 2 個獨立抗原表位的大分子物質，如細胞因子（IL-6、TNF-α 等）、蛋白類腫瘤標志物、病原微生物結構蛋白、抗體藥物等。核心原理步驟：包被固化：將針對待測抗原的特異性捕獲抗體固定于酶標板孔內，洗滌去除未結合的多余抗體，封閉空白位點。抗原捕獲：加入待測樣本 / 標準品，樣本中的待測抗原與固相捕獲抗體特異性結合，形成 “捕獲抗體 - 待測抗原” 復合物，洗滌去除未結合的樣本雜質。夾心結合：加入針對待測抗原另一獨立表位的酶標記檢測抗體，與復合物中的抗原結合，形成 “捕獲抗體 - 待測抗原 - 酶標檢測抗體” 的雙抗體夾心結構，洗滌去除未結合的酶標抗體。顯色定量：加入酶對應底物，酶催化底物發生顯色反應；終止反應后，通過酶標儀測定 OD 值。顯色深淺（OD 值）與樣本中待測抗原的含量呈正相關，通過標準品繪制的濃度 - OD 值標準曲線，即可計算出樣本中待測抗原的＊＊濃度。2. 競爭法（小分子抗原 / 半抗原檢測核心方案）核心適用場景：檢測僅含單個抗原表位的小分子半抗原，如激素、農藥、獸藥、真菌毒素、藥物殘留、毒品代謝物等，也可用于部分抗體的定量檢測。核心原理（抗原包被型，商品化試劑盒＊常用）：包被固化：將待測抗原（或抗原 - 載體偶聯物）固定于酶標板孔內，洗滌去除多余包被物，封閉空白位點。競爭性結合：同時加入待測樣本與固定劑量的酶標抗體，樣本中游離的待測抗原，與固相板上包被的抗原，競爭性結合酶標抗體的有限結合位點。競爭邏輯：樣本中待測抗原含量越高，能與固相包被抗原結合的酶標抗體就越少；反之，待測抗原含量越低，結合到固相上的酶標抗體就越多。顯色定量：洗滌去除未結合的游離物質后，加入底物顯色。OD 值與樣本中待測抗原的含量呈負相關，通過標準曲線完成定量檢測。3. 間接法（抗體檢測金標準方案）核心適用場景：檢測樣本中的特異性抗體，如病原體感染抗體（乙肝、新冠病毒抗體）、自身免疫抗體、疫苗免疫后的抗體滴度檢測、過敏原特異性抗體檢測等。核心原理步驟：包被固化：將與待測抗體對應的特異性抗原固定于酶標板孔內，洗滌去除多余抗原，封閉空白位點。一抗結合：加入待測樣本，樣本中針對包被抗原的特異性抗體（一抗，即待測抗體）與固相抗原特異性結合，形成 “包被抗原 - 待測抗體” 復合物，洗滌去除未結合的雜蛋白與非特異性抗體。二抗結合：加入酶標記的抗種屬抗體（二抗，如酶標抗人 IgG 抗體），與復合物中的待測抗體結合，洗滌去除未結合的酶標二抗。顯色判定：加入底物顯色，OD 值與樣本中待測抗體的含量呈正相關，既可通過臨界值判定陰陽性（定性），也可通過梯度稀釋實現抗體滴度的定量檢測。4. 抗體捕獲法（IgM 抗體早期感染檢測專用）核心適用場景：病原體急性感染的早期 IgM 抗體檢測，如急性甲肝、新冠早期感染、優生優育 TORCH IgM 檢測等，可有效排除樣本中 IgG 抗體的干擾，避免假陽性。核心原理步驟：包被：將抗人 IgM 抗體固定于酶標板孔內，洗滌封閉后，加入待測樣本，捕獲樣本中所有的 IgM 抗體（包括待測特異性 IgM 和非特異性 IgM）。抗原結合：洗滌后加入特異性抗原，僅與捕獲到的待測特異性 IgM 結合。酶標檢測：加入酶標記的針對該抗原的特異性抗體，與抗原結合，再次洗滌后加入底物顯色，OD 值與樣本中待測特異性 IgM 抗體含量正相關。5. 直接法（基礎原型，極少單獨用于商品化試劑盒）核心原理：將抗原包被于固相板，封閉后直接加入酶標記的特異性抗體，抗原抗體結合后洗滌、顯色，OD 值與結合的酶標抗體量正相關。特點：操作簡單、步驟少、實驗周期短；但需為每種檢測抗體制備專屬酶標物，通用性差、成本高，且非特異性干擾強，僅適用于目標抗原含量較高的快速定性篩查、抗體特異性驗證。方法主要檢測對象信息與濃度關系適用分子大小典型應用雙抗體夾心法抗原（蛋白）正相關（濃度高→色深）大分子（多表位）小分子、半抗原直接法抗原正相關大分子抗原定性、包被驗證間接法抗體正相關抗體病毒抗體、自身抗體、免疫滴度競爭法抗原（小分子）負相關（濃度高→色淺）小分子、半抗原類固醇激素、藥物、多肽、毒素三、ELISA 技術的核心核心優勢原理高特異性：基于抗原 - 抗體的免疫識別反應，僅針對靶標分子的特定表位結合，可＊大程度規避樣本中其他物質的交叉干擾。超高靈敏度：酶的級聯催化放大效應，可將微量的免疫結合信號放大百萬倍，實現常規方法無法檢測的超微量物質定量。寬線性定量范圍：通過標準品梯度稀釋構建標準曲線，可實現多個數量級范圍內的＊＊定量，適配不同濃度樣本的檢測需求。操作標準化、通量高：96 孔板體系可實現批量樣本同步檢測，操作流程標準化，適配自動化設備，適合臨床與大規模篩查場景。四、試劑盒的組成五、樣本處理1. 血清樣本：采集靜脈血后，室溫靜置2-4小時，3000rpm離心10分鐘，收集上層血清，避免溶血，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。2. 血漿樣本：使用抗凝管（EDTA、肝素等）采集血液，采集后立即輕輕顛倒混勻，3000rpm離心10分鐘，收集上層血漿，-20℃或-80℃保存。3. 組織培養上清：細胞培養完成后，3000rpm離心5分鐘，去除細胞碎片，收集上清液，-20℃保存。4. 細胞/組織裂解液：取適量細胞或組織樣本，加入預冷的裂解液，冰浴勻漿后，4℃、12000rpm離心15分鐘，收集上清液，-80℃保存。5. 所有樣本在檢測前需恢復至室溫，震蕩混勻，若有沉淀需再次離心去除，避免影響檢測結果。根據樣本實際情況，可使用樣本稀釋液進行適當稀釋，確保檢測濃度落在標準曲線范圍內。六、實驗步驟1. 試劑準備：實驗前將所有試劑盒組分及樣本恢復至室溫（25℃左右），濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋至1×工作液，濃縮檢測抗體、鏈霉親和素-HRP按說明書比例用樣本稀釋液稀釋至工作液，現配現用。2. 加樣：根據實驗需求確定所需板條數量，空白孔加入50μL樣本稀釋液，標準品孔加入50μL不同濃度的標準品工作液，待測樣本孔加入50μL處理后的樣本（已稀釋的樣本直接加入，未稀釋樣本可根據情況用樣本稀釋液1:1稀釋后加入）；隨后向所有孔中加入50μL生物素標記檢測抗體工作液，輕輕振蕩混勻。3. 孵育：蓋上封板膜，置于37℃恒溫箱中孵育60分鐘。4. 洗滌：小心揭開封板膜，甩去孔內液體，每孔加滿1×洗滌液，靜置30秒后甩去，用吸水紙拍干；重復此洗滌步驟3次，若使用洗板機，洗滌次數可增加1次。5. 加酶：每孔加入80μL鏈霉親和素-HRP工作液，輕輕振蕩混勻，蓋上封板膜，37℃孵育30分鐘。6. 洗滌：重復步驟4的洗滌操作，徹底去除未結合的酶結合物。7. 顯色：每孔依次加入50μL顯色液A和50μL顯色液B，輕輕振蕩混勻，蓋上封板膜，37℃避光孵育10分鐘，此時陽性孔會逐漸呈現藍色。8. 終止：取出酶標板，迅速向每孔加入50μL終止液，輕輕振蕩混勻，藍色會立即轉為黃色。9. 檢測：加入終止液后10分鐘內，使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的OD值（若需校正，可在630nm波長處測定參考OD值，＊終檢測OD值=450nm OD值-630nm OD值）。七、結果計算1. 首先計算每個標準品、空白孔及樣本孔的平均OD值（復孔檢測時），空白孔OD值作為陰性對照，用于扣除背景干擾。2. 以標準品濃度為橫坐標（X軸，對數坐標），對應的OD值為縱坐標（Y軸，線性坐標），使用專業繪圖軟件（如Excel、GraphPad Prism）繪制標準曲線，計算回歸方程（R2值應≥0.99，確保標準曲線的可靠性）。3. 將扣除背景后的樣本OD值代入回歸方程，計算出樣本中[檢測指標]的初步濃度，再根據樣本的稀釋倍數計算出樣本的實際濃度。（僅供參考）八、試劑盒性能1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度如資料所示。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個月九、儲存與運輸1. 試劑盒未開封時，所有組分需密封置于2~8℃冷藏保存，避免冷凍，其中標準品凍干品可置于-20℃長期保存。2. 試劑盒開封后，預包被酶標板需密封防潮保存，剩余試劑需按原儲存條件保存，避免反復凍融，開封后建議在1個月內用完。3. 運輸過程采用冷鏈運輸（2~8℃），避免高溫、劇烈震蕩，確保產品性能穩定。十、注意事項實驗前請仔細閱讀本說明書，嚴格按照實驗步驟操作，確保實驗條件（溫度、孵育時間）符合要求。所有試劑使用前需充分混勻，但避免劇烈震蕩產生大量泡沫，以免影響加樣精度。洗滌步驟至關重要，需確保洗滌充分，避免未結合的雜蛋白或酶結合物殘留，導致背景值偏高。顯色反應需避光進行，終止液加入后應立即檢測OD值，避免放置時間過長導致顏色消退，影響檢測結果。實驗所用樣本、試劑及廢棄物均需按生物安全規范處理，避免交叉污染。本試劑盒僅用于科研用途，不用于臨床診斷。十一、售后服務上海篤瑪生物科技有限公司擁有專業的技術服務團隊，為您提供全程技術支持。如您在產品使用過程中有任何疑問，或對產品質量有異議，請及時聯系我們的技術顧問，我們將在24小時內響應，為您提供實驗方案優化、問題排查等專業服務。
牛（Bovine）次黃嘌呤（Hypoxanthine）ELISA檢測試劑盒（競爭法）產品貨號：DM-Cat9888產品規格：48/96TELISA 檢測試劑盒的檢測原理ELISA 全稱酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），是目前生物檢測領域應用＊廣泛的免疫分析技術，該試劑盒僅用于科研檢測。其核心總原理是：基于抗原與抗體的特異性免疫識別結合反應，耦合酶對底物的高效催化信號放大效應，將免疫結合的特異性信號轉化為可通過酶標儀定量檢測的顯色 / 光信號；通過固相吸附與洗滌步驟實現結合態與游離態物質的徹底分離，＊終實現對待測物（抗原或抗體）的高特異性、高靈敏度定性與定量檢測。一、ELISA 試劑盒的核心基礎元件與作用所有 ELISA 試劑盒均圍繞四大核心元件構建，是實現檢測的基礎：固相載體：主流為 96 孔 / 384 孔聚苯乙烯酶標板，可通過疏水作用穩定吸附蛋白類抗原 / 抗體，且不破壞其免疫活性，為免疫反應提供固定的固相界面。免疫核心試劑：包被用捕獲抗原 / 抗體、酶標記的檢測抗原 / 抗體（酶標結合物）。基于抗原表位與抗體互補決定區（CDR）的特異性結合，是保證檢測特異性的核心，可＊大程度避免交叉反應。酶 - 底物信號系統：＊常用辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）。酶分子具備極高的催化效率，一個酶分子可在短時間內催化大量底物分子生成有色產物，實現檢測信號的級聯放大，讓 ELISA 可檢測 pg/mL 甚至 fg/mL 級別的微量待測物；產物的吸光度（OD 值）與待測物含量存在明確的劑量 - 效應關系，是定量檢測的核心依據。封閉與洗滌體系：封閉液（如 BSA、脫脂奶粉）用于覆蓋酶標板上未吸附蛋白的空白位點，阻斷非特異性結合，降低背景干擾；洗滌液用于徹底分離固相結合的免疫復合物與游離的未結合物質，去除樣本雜質和多余試劑，保障檢測結果的準確性。二、主流 ELISA 試劑盒的分型檢測原理根據檢測靶標、分子大小與應用場景的不同，商品化 ELISA 試劑盒主要分為以下 5 種經典類型，其中雙抗體夾心法、競爭法、間接法為市場主流。1. 雙抗體夾心法（大分子抗原檢測＊＊，＊主流）核心適用場景：檢測具有至少 2 個獨立抗原表位的大分子物質，如細胞因子（IL-6、TNF-α 等）、蛋白類腫瘤標志物、病原微生物結構蛋白、抗體藥物等。核心原理步驟：包被固化：將針對待測抗原的特異性捕獲抗體固定于酶標板孔內，洗滌去除未結合的多余抗體，封閉空白位點。抗原捕獲：加入待測樣本 / 標準品，樣本中的待測抗原與固相捕獲抗體特異性結合，形成 “捕獲抗體 - 待測抗原” 復合物，洗滌去除未結合的樣本雜質。夾心結合：加入針對待測抗原另一獨立表位的酶標記檢測抗體，與復合物中的抗原結合，形成 “捕獲抗體 - 待測抗原 - 酶標檢測抗體” 的雙抗體夾心結構，洗滌去除未結合的酶標抗體。顯色定量：加入酶對應底物，酶催化底物發生顯色反應；終止反應后，通過酶標儀測定 OD 值。顯色深淺（OD 值）與樣本中待測抗原的含量呈正相關，通過標準品繪制的濃度 - OD 值標準曲線，即可計算出樣本中待測抗原的＊＊濃度。2. 競爭法（小分子抗原 / 半抗原檢測核心方案）核心適用場景：檢測僅含單個抗原表位的小分子半抗原，如激素、農藥、獸藥、真菌毒素、藥物殘留、毒品代謝物等，也可用于部分抗體的定量檢測。核心原理（抗原包被型，商品化試劑盒＊常用）：包被固化：將待測抗原（或抗原 - 載體偶聯物）固定于酶標板孔內，洗滌去除多余包被物，封閉空白位點。競爭性結合：同時加入待測樣本與固定劑量的酶標抗體，樣本中游離的待測抗原，與固相板上包被的抗原，競爭性結合酶標抗體的有限結合位點。競爭邏輯：樣本中待測抗原含量越高，能與固相包被抗原結合的酶標抗體就越少；反之，待測抗原含量越低，結合到固相上的酶標抗體就越多。顯色定量：洗滌去除未結合的游離物質后，加入底物顯色。OD 值與樣本中待測抗原的含量呈負相關，通過標準曲線完成定量檢測。3. 間接法（抗體檢測金標準方案）核心適用場景：檢測樣本中的特異性抗體，如病原體感染抗體（乙肝、新冠病毒抗體）、自身免疫抗體、疫苗免疫后的抗體滴度檢測、過敏原特異性抗體檢測等。核心原理步驟：包被固化：將與待測抗體對應的特異性抗原固定于酶標板孔內，洗滌去除多余抗原，封閉空白位點。一抗結合：加入待測樣本，樣本中針對包被抗原的特異性抗體（一抗，即待測抗體）與固相抗原特異性結合，形成 “包被抗原 - 待測抗體” 復合物，洗滌去除未結合的雜蛋白與非特異性抗體。二抗結合：加入酶標記的抗種屬抗體（二抗，如酶標抗人 IgG 抗體），與復合物中的待測抗體結合，洗滌去除未結合的酶標二抗。顯色判定：加入底物顯色，OD 值與樣本中待測抗體的含量呈正相關，既可通過臨界值判定陰陽性（定性），也可通過梯度稀釋實現抗體滴度的定量檢測。4. 抗體捕獲法（IgM 抗體早期感染檢測專用）核心適用場景：病原體急性感染的早期 IgM 抗體檢測，如急性甲肝、新冠早期感染、優生優育 TORCH IgM 檢測等，可有效排除樣本中 IgG 抗體的干擾，避免假陽性。核心原理步驟：包被：將抗人 IgM 抗體固定于酶標板孔內，洗滌封閉后，加入待測樣本，捕獲樣本中所有的 IgM 抗體（包括待測特異性 IgM 和非特異性 IgM）。抗原結合：洗滌后加入特異性抗原，僅與捕獲到的待測特異性 IgM 結合。酶標檢測：加入酶標記的針對該抗原的特異性抗體，與抗原結合，再次洗滌后加入底物顯色，OD 值與樣本中待測特異性 IgM 抗體含量正相關。5. 直接法（基礎原型，極少單獨用于商品化試劑盒）核心原理：將抗原包被于固相板，封閉后直接加入酶標記的特異性抗體，抗原抗體結合后洗滌、顯色，OD 值與結合的酶標抗體量正相關。特點：操作簡單、步驟少、實驗周期短；但需為每種檢測抗體制備專屬酶標物，通用性差、成本高，且非特異性干擾強，僅適用于目標抗原含量較高的快速定性篩查、抗體特異性驗證。方法主要檢測對象信息與濃度關系適用分子大小典型應用雙抗體夾心法抗原（蛋白）正相關（濃度高→色深）大分子（多表位）小分子、半抗原直接法抗原正相關大分子抗原定性、包被驗證間接法抗體正相關抗體病毒抗體、自身抗體、免疫滴度競爭法抗原（小分子）負相關（濃度高→色淺）小分子、半抗原類固醇激素、藥物、多肽、毒素三、ELISA 技術的核心核心優勢原理高特異性：基于抗原 - 抗體的免疫識別反應，僅針對靶標分子的特定表位結合，可＊大程度規避樣本中其他物質的交叉干擾。超高靈敏度：酶的級聯催化放大效應，可將微量的免疫結合信號放大百萬倍，實現常規方法無法檢測的超微量物質定量。寬線性定量范圍：通過標準品梯度稀釋構建標準曲線，可實現多個數量級范圍內的＊＊定量，適配不同濃度樣本的檢測需求。操作標準化、通量高：96 孔板體系可實現批量樣本同步檢測，操作流程標準化，適配自動化設備，適合臨床與大規模篩查場景。四、試劑盒的組成五、樣本處理1. 血清樣本：采集靜脈血后，室溫靜置2-4小時，3000rpm離心10分鐘，收集上層血清，避免溶血，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。2. 血漿樣本：使用抗凝管（EDTA、肝素等）采集血液，采集后立即輕輕顛倒混勻，3000rpm離心10分鐘，收集上層血漿，-20℃或-80℃保存。3. 組織培養上清：細胞培養完成后，3000rpm離心5分鐘，去除細胞碎片，收集上清液，-20℃保存。4. 細胞/組織裂解液：取適量細胞或組織樣本，加入預冷的裂解液，冰浴勻漿后，4℃、12000rpm離心15分鐘，收集上清液，-80℃保存。5. 所有樣本在檢測前需恢復至室溫，震蕩混勻，若有沉淀需再次離心去除，避免影響檢測結果。根據樣本實際情況，可使用樣本稀釋液進行適當稀釋，確保檢測濃度落在標準曲線范圍內。六、實驗步驟1. 試劑準備：實驗前將所有試劑盒組分及樣本恢復至室溫（25℃左右），濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋至1×工作液，濃縮檢測抗體、鏈霉親和素-HRP按說明書比例用樣本稀釋液稀釋至工作液，現配現用。2. 加樣：根據實驗需求確定所需板條數量，空白孔加入50μL樣本稀釋液，標準品孔加入50μL不同濃度的標準品工作液，待測樣本孔加入50μL處理后的樣本（已稀釋的樣本直接加入，未稀釋樣本可根據情況用樣本稀釋液1:1稀釋后加入）；隨后向所有孔中加入50μL生物素標記檢測抗體工作液，輕輕振蕩混勻。3. 孵育：蓋上封板膜，置于37℃恒溫箱中孵育60分鐘。4. 洗滌：小心揭開封板膜，甩去孔內液體，每孔加滿1×洗滌液，靜置30秒后甩去，用吸水紙拍干；重復此洗滌步驟3次，若使用洗板機，洗滌次數可增加1次。5. 加酶：每孔加入80μL鏈霉親和素-HRP工作液，輕輕振蕩混勻，蓋上封板膜，37℃孵育30分鐘。6. 洗滌：重復步驟4的洗滌操作，徹底去除未結合的酶結合物。7. 顯色：每孔依次加入50μL顯色液A和50μL顯色液B，輕輕振蕩混勻，蓋上封板膜，37℃避光孵育10分鐘，此時陽性孔會逐漸呈現藍色。8. 終止：取出酶標板，迅速向每孔加入50μL終止液，輕輕振蕩混勻，藍色會立即轉為黃色。9. 檢測：加入終止液后10分鐘內，使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的OD值（若需校正，可在630nm波長處測定參考OD值，＊終檢測OD值=450nm OD值-630nm OD值）。七、結果計算1. 首先計算每個標準品、空白孔及樣本孔的平均OD值（復孔檢測時），空白孔OD值作為陰性對照，用于扣除背景干擾。2. 以標準品濃度為橫坐標（X軸，對數坐標），對應的OD值為縱坐標（Y軸，線性坐標），使用專業繪圖軟件（如Excel、GraphPad Prism）繪制標準曲線，計算回歸方程（R2值應≥0.99，確保標準曲線的可靠性）。3. 將扣除背景后的樣本OD值代入回歸方程，計算出樣本中[檢測指標]的初步濃度，再根據樣本的稀釋倍數計算出樣本的實際濃度。（僅供參考）八、試劑盒性能1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。2. 靈敏度：＊低檢測濃度如資料所示。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個月九、儲存與運輸1. 試劑盒未開封時，所有組分需密封置于2~8℃冷藏保存，避免冷凍，其中標準品凍干品可置于-20℃長期保存。2. 試劑盒開封后，預包被酶標板需密封防潮保存，剩余試劑需按原儲存條件保存，避免反復凍融，開封后建議在1個月內用完。3. 運輸過程采用冷鏈運輸（2~8℃），避免高溫、劇烈震蕩，確保產品性能穩定。十、注意事項實驗前請仔細閱讀本說明書，嚴格按照實驗步驟操作，確保實驗條件（溫度、孵育時間）符合要求。所有試劑使用前需充分混勻，但避免劇烈震蕩產生大量泡沫，以免影響加樣精度。洗滌步驟至關重要，需確保洗滌充分，避免未結合的雜蛋白或酶結合物殘留，導致背景值偏高。顯色反應需避光進行，終止液加入后應立即檢測OD值，避免放置時間過長導致顏色消退，影響檢測結果。實驗所用樣本、試劑及廢棄物均需按生物安全規范處理，避免交叉污染。本試劑盒僅用于科研用途，不用于臨床診斷。十一、售后服務上海篤瑪生物科技有限公司擁有專業的技術服務團隊，為您提供全程技術支持。如您在產品使用過程中有任何疑問，或對產品質量有異議，請及時聯系我們的技術顧問，我們將在24小時內響應，為您提供實驗方案優化、問題排查等專業服務。
31011502012822