WB實(shí)驗(yàn)小白必看
WB實(shí)驗(yàn)一圖搞定全步驟~你是不是也對(duì)著Western Blot實(shí)驗(yàn)步驟一頭霧水?別慌!這張流程圖幫你理清從“蛋白提取”到“條帶曝光”的全過(guò)程???? 第一步:提取蛋白 選擇合適的裂解液去裂解細(xì)胞/組織 → 低溫+抑制劑保護(hù)?? 第二步:蛋白定量 BCA法或其他蛋白定量法檢測(cè)蛋白濃度 → 充分變性?? 第三步:電泳分離 上樣 → 跑膠(根據(jù)分子量大小分離)?? 注意膠濃度、電壓、避免產(chǎn)熱過(guò)多?? 第四步:轉(zhuǎn)膜 蛋白條帶轉(zhuǎn)印到PVDF/NC膜?? 小貼士:膜要活化、無(wú)氣泡、冰浴降溫,轉(zhuǎn)完用麗春紅檢查效率?? 第五步:封閉 + 抗體孵育 封閉非特異位點(diǎn) → 一抗(4°C 過(guò)夜)→ 二抗(室溫1-2h)?? 封閉液選牛奶或BSA,使用一抗和二抗前都要先洗洗洗!?? 第六步:曝光檢測(cè) 加化學(xué)發(fā)光底物(ECL)→ 二抗上的酶激發(fā)熒光 → 曝光或成像儀采集條帶?? ECL現(xiàn)配現(xiàn)用,控制曝光時(shí)間,保持膜濕潤(rùn)? 出現(xiàn)非特異條帶??jī)?yōu)化抗體濃度或封閉條件吧~保存這張圖,實(shí)驗(yàn)再也不迷路??@你身邊正在苦戰(zhàn)WB的小伙伴,一起變高手??