WB實驗小白必看
WB實驗一圖搞定全步驟~你是不是也對著Western Blot實驗步驟一頭霧水？別慌！這張流程圖幫你理清從“蛋白提取”到“條帶曝光”的全過程???? 第一步：提取蛋白 選擇合適的裂解液去裂解細胞/組織 → 低溫+抑制劑保護?? 第二步：蛋白定量 BCA法或其他蛋白定量法檢測蛋白濃度 → 充分變性?? 第三步：電泳分離 上樣 → 跑膠（根據分子量大小分離）?? 注意膠濃度、電壓、避免產熱過多?? 第四步：轉膜 蛋白條帶轉印到PVDF/NC膜?? 小貼士：膜要活化、無氣泡、冰浴降溫，轉完用麗春紅檢查效率?? 第五步：封閉 + 抗體孵育 封閉非特異位點 → 一抗（4°C 過夜）→ 二抗（室溫1-2h）?? 封閉液選牛奶或BSA，使用一抗和二抗前都要先洗洗洗！?? 第六步：曝光檢測 加化學發光底物（ECL）→ 二抗上的酶激發熒光 → 曝光或成像儀采集條帶?? ECL現配現用，控制曝光時間，保持膜濕潤? 出現非特異條帶？優化抗體濃度或封閉條件吧～保存這張圖，實驗再也不迷路??@你身邊正在苦戰WB的小伙伴，一起變高手??
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